| ● いつもの培養準備で |
| NCPキットで3次元培養をしていただくためにご用意いただくものは、これまでの単層培養のものと全く同じです。 |
>通常の細胞培養器具一式
・マイクロピペット
・チップ
・遠心機
・チューブ
・吸引器
・血球計算盤
>評価細胞
>細胞数測定用市販キット
(Invitrogen社Picogreenまたは Promega社 CelltiterGloを推奨します) |
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| ● いつもの培養操作で |
| さあ、お試しキットに同封されている取り扱い説明書(プロトコール)にしたがって培養を開始しましょう。 |
| STEP1 |
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STEP2 |
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STEP3 |
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STEP4 |
| NCPに培地を入れて15分間プレインキュベーションします |
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細胞を播種します※(取扱説明書の推奨細胞数を播種)
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インキュベータ(37℃、5%CO2)にて培養を開始します |
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3−4日で、NCP上に細胞は立体的に増殖し、スフェロイドを形成します |
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※シングルセルで撒くことが重要です |
● 注意点
・推奨継代数は15回程度、細胞使用期間は2ヶ月以内です。
それ以上の継代では、接着性などの面で細胞にセレクションがかかり、
固有の性質を保有したスフェロイド形成が損なわれる可能性があります。
・プレインキュベーションを行う際に気泡の混入なきよう注意ください。
・細胞を播種後のハンドリングは、細胞の偏り・はがれを防ぐためにプレートをゆすらないでください。
・培養開始後、3−4日ごとの培地交換を推奨しておりますが、実験系によっては1週間程度培地交換なしで培養することも可能です。 |
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